【产品名称】

商品名称：产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)荧光PCR检测试剂盒

Name ：Nucleic acid detection kit for enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) (PCR- fluorescence probe method)

【包装规格】48T/盒

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】

本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测，辅助诊断。

【试剂组成】

详见说明书

注：

1） 不同批号试剂不能混用。

2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【检验原理】

本试剂盒对指标特异核酸序列设计引物和探针，用一步法荧光RT-PCR 技术对指标 RNA 进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学诊断。

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

【标本采集】

咽拭子：应使用与用采样拭子，适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌 部 ； 迅 速 将 拭 子 放 入 标 本 采 集 管 中 ， 旋 紧 管 盖 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。

全血：疑似感染的血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 离心 2min，取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。痰： 以清晨的第一口痰为宜。先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。

【标本采集】

病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但丌能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

1.2DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2 RNA 提取

推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、

stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且有明显的扩增曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显曲线的样本建议重复试验，重复试验结果如果同样出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线则为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

6. 质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线且无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性

① 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

②样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

③阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

④病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

⑤不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

⑥试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取 O/P 液 2~3mL。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【产品图片】

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

  生产地址：金海公路3265号14幢11546室 

上海烜雅生物科技有限公司生产的产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)荧光PCR检测试剂盒质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

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本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)荧光PCR检测试剂盒新产品：

柱式 DNA 胶回收试剂盒    XY-TE-1640    100 次    

柱式 DNA 胶回收试剂盒    XY-TE-1641    50 次    

一管式 DNA 胶回收试剂盒    XY-TE-1691    100 次    

一管式 DNA 胶回收试剂盒    XY-TE-1692    30 次    

cDNA 第一链合成试剂盒    XY-TE-1711    10 次    

cDNA 第一链合成试剂盒    XY-TE-1712    50 次    

DNA 快速连接试剂盒    XY-TE-1745    100 次    

DNA 快速连接试剂盒    XY-TE-1746    30 次    

miRNA PAGE 胶回收试剂盒    XY-TE-1748    40 次    

即用型 PCR 试剂盒 2.0     XY-TE-1762    1 mL    

即用型 PCR 试剂盒 2.0     XY-TE-1763    9 mL    

免质粒提取筛选试剂盒    XY-TE-1764    1000 次    

DNA PAGE 胶回收试剂盒    XY-TE-1775    100 次    

DNA PAGE 胶回收试剂盒    XY-TE-1776    30 次    

柱式 DNA PAGE 胶回收试剂盒    XY-TE-1797    50 次    

柱式 miRNA PAGE 胶回收试剂盒    XY-TE-1798    50 次    

柱式 RNA 纯化试剂盒    XY-TE-1799    50 次    

两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)    XY-TE-1801    50 次    

柱式 OLIGO 回收试剂盒    XY-TE-1802    50 次    

Bradford 法蛋白定量试剂盒    XY-TE-1828    100mL    

小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒     

小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA试剂盒     

小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒     

小鼠氧化型谷胱甘肽(GSGS)ELISA试剂盒     

小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒     

小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)ELISA试剂盒     

小鼠c-fos ELISA试剂盒     

小鼠c-jun ELISA试剂盒     

小鼠抗透明带抗体(aZP)ELISA试剂盒     

小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒     

小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒     

小鼠Qa淋巴细胞抗原2(Qa-2)ELISA试剂盒     

小鼠D-乳酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒     

小鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒     

小鼠样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)ELISA试剂盒     

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小鼠溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒     

小鼠β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)ELISA试剂盒     

小鼠骨退化特异标志物(CTX-2)ELISA试剂盒     

小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒     

小鼠紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒     

小鼠紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒     

小鼠角化细胞因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒     

小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒     

小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒     

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒     

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒     

小鼠样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)ELISA试剂盒     

小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒     

小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒     

小鼠溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒     

小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA试剂盒     

小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA试剂盒     

小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ELISA试剂盒     

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC) ELISA试剂盒     

小鼠紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒    

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小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒