【产品名称】

商品名称：鱼类神经坏死病毒（VNN）荧光PCR检测试剂盒

Name ：Nucleic acid detection kit for fish nervous necrosis virus (VNN) (RT-PCR fluorescence probe)

【包装规格】48T/盒

鱼类神经坏死病毒（VNN）荧光PCR检测试剂盒【预期用途】

本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测，辅助诊断。

【试剂组成】

名 称	规 格
酶液	50μL×1 管
反应液	1.0mL×1 管
阳性质控品	50μL ×1 管
阴性质控品	250μL ×1 管
核酸提取液	1.5ml×2管

详见说明书

注：

1） 不同批号试剂不能混用。

2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【检验原理】

本试剂盒对指标特异核酸序列设计引物和探针，用一步法荧光RT-PCR 技术对指标 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

鱼类神经坏死病毒（VNN）荧光PCR检测试剂盒【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

【标本采集】

咽拭子：应使用与用采样拭子，适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌 部 ； 迅 速 将 拭 子 放 入 标 本 采 集 管 中 ， 旋 紧 管 盖 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。

全血：疑似感染病人的静脉血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 离心 2min，取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。痰： 以清晨的 口痰为宜。先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。

【标本采集】

病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但丌能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

1.2DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2 RNA 提取

推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	反应液	酶液
用量	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	42℃	20min	否
2	1 cycle	95℃	10min	否
3	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、

stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且有明显的扩增曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显曲线的样本建议重复试验，重复试验结果如果同样出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线则为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

6. 质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线且无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性

① 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

②样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

③阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

④病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

⑤不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

⑥试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

鱼类神经坏死病毒（VNN）荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取 O/P 液 2~3mL。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【产品图片】

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

生产地址：金海公路3265号14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生产的鱼类神经坏死病毒（VNN）荧光PCR检测试剂盒质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

请直接向我司客服索取说明书

本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

鱼类神经坏死病毒（VNN）荧光PCR检测试剂盒新产品：

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1191    寨卡（zika）病毒核-酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1192    黄热病毒（YFV）核-酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1193    布尼亚病毒（BV）核-酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1194 登革热病毒4型(DFV-IV)核-酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1195 登革热病毒1型(DFV-I)核-酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)

病毒及原生生物类    XY-EP-R-1196    病毒及原生生物类荧光PCR试剂盒

动物源性成分    XY-SG-D-1197    猪源性成分(Porcine)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

动物源性成分    XY-SG-D-1198    牛源性成分(Bovine)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

动物源性成分    XY-SG-D-1199    羊源性成分(Ovine)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

动物源性成分    XY-SG-D-1200    鸡源性成分(Chicken)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒

人α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)ELISA试剂盒

人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA试剂盒

人心肌特异性肌钙蛋白T ELISA试剂盒

人肌球蛋白重链(MHC)ELISA试剂盒

人热休克蛋白27(HSP-27)ELISA试剂盒

人血管抑素/血管稳定蛋白(ANG)ELISA试剂盒

人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)ELISA试剂盒

人血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒

人肌球蛋白轻链(MLC)ELISA试剂盒

人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)ELISA试剂盒

人超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒

人肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒

人血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒

人热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒

人热休克蛋白糖蛋白96(HSP   gp96)ELISA试剂盒

人心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒

人铜蓝蛋白(CP/CER)ELISA试剂盒

人热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒

人热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒

人热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒

人热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒

人肌球蛋白(MYS)ELISA试剂盒

人凝溶胶蛋白(GS)ELISA试剂盒

人C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒

人醛固酮(ALD)ELISA试剂盒

人肌红蛋白(MYO/MB)ELISA试剂盒

人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒

人血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie1)ELISA试剂盒

人血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒

人血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒

人血管生长素(ANG)ELISA试剂盒

人血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒

人帕金森氏病2Parkin(Park2)ELISA试剂盒

人纽蛋白(VCL)ELISA试剂盒

人轴突生长诱向因子4(Ntn4)ELISA试剂盒

人轴突生长诱向因子1(Ntn1)ELISA试剂盒

人硫酸脑苷酯(SFT)ELISA试剂盒

人再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA试剂盒

人多功能蛋白聚糖(VS)ELISA试剂盒

人B细胞κ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)ELISA试剂盒

人ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA试剂盒

人类似RIKEN cDNA   4933429F08 基因 ELISA试剂盒

人孕酮和adipoQ受体家族成员Ⅶ(PAQR7)ELISA试剂盒

人集蛋白亚家族成员11(COLEC11)ELISA试剂盒

人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)ELISA试剂盒

人类似RIKEN cDNA   A630077B13 基因 ELISA试剂盒

人类似RIKEN cDNA   3110050K21 基因 ELISA试剂盒

人类似RIKEN cDNA   2610307008 基因 ELISA试剂盒

人类似RIKEN cDNA 2010109K09 基因 ELISA试剂盒

人ras同源物基因家族成员b(RHOB)ELISA试剂盒

人假定蛋白LOC677340   ELISA试剂盒

人假定蛋白LOC433328   ELISA试剂盒

人髓样分化因子初次应答基因88(MYD88)ELISA试剂盒

人干扰素活化基因205(Ifi205)ELISA试剂盒

人组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)ELISA试剂盒

人白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)ELISA试剂盒

人C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)ELISA试剂盒

人假定蛋白LOC677168   ELISA试剂盒

人淋巴细胞抗原6复合物基因座A(Ly6a)ELISA试剂盒

人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员1(EAR1)ELISA试剂盒

人混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)ELISA试剂盒

人过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARGC1)ELISA试剂盒

人类似cDNA顺序BC027382 ELISA试剂盒

人类似RIKEN cDNA   4931408D14 基因 ELISA试剂盒

人REST协阻抑因子3(RCOR3)ELISA试剂盒

人集蛋白亚家族成员11(COLEC11)ELISA试剂盒

人α1β糖蛋白(α1β-GP)ELISA试剂盒

人可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)ELISA试剂盒