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产地 | 美国/中国 |
品牌 | xuanya |
货号 | XY-RD-D-1078 |
用途 | 科研 |
包装规格 | 48T |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 |
【产品名称】
通用名称:新孢子虫(Ne)荧光PCR检测试剂盒
【包装规格】48T/盒
Name :New nucleic acid detection kit for new sporozoite (Ne) (PCR- fluorescent probe)
新孢子虫(Ne)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 | 反应液 | 酶液 |
用量(样本数为 N) | 20μL | 1μL |
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。
加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
PCR 扩增(核酸扩增区)
将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)
NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。
推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
结果分析判定
结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
检测方法的局限性
样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
质控标准
阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
【参考文献】
国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.
张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.
吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].
新孢子虫(Ne)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
患病动物:腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人:痰;尿液、血液
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【产品图片】
【生产企业】
企业名称:上海烜雅生物科技有限公司
生产地址:金海公路3265号14幢11546室
上海烜雅生物科技有限公司生产的新孢子虫(Ne)荧光PCR检测试剂盒供应质量高,价格低,售后有保证。为您的实验保驾护航。
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本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断。
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