【产品名称】

通用名称：布氏杆菌(BS)荧光PCR检测试剂盒

【包装规格】48T/盒

Name ：Brucella (BS) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)

布氏杆菌(BS)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】

本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标，用于指标的定量检测辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针，用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

布氏杆菌(BS)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】

样品处理（样本处理区）

样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子取 100μL 进行提取。

【标本采集】

 病死或扑杀猪，无菌采集肺部位或/非部位交界处的样品；生猪灭菌

棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中

【标本采集】

 病死或扑杀猪，取分泌物、血液、*、扁桃体、*和淋巴结等

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本

运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

组织样品：称取组织样品约 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，匀浆后取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；

痰、尿液等液体样品：取 100μL 于灭菌离心管中；

血液样品：取抗凝血下层血细胞 50μL，加入 100μL 双蒸水吹匀。

DNA 提取

对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000

rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒

（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）

将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）

NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

推荐循环参数设置：

质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

【参考文献】

国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.

张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.

吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].

布氏杆菌(BS)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

患病动物：腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人：痰；尿液、血液

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【产品图片】

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

生产地址：金海公路3265号14幢11546室 

上海烜雅生物科技有限公司生产的布氏杆菌(BS)荧光PCR检测试剂盒供应质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

请直接向我司客服索取说明书

本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

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