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产地 | 美国/中国 |
品牌 | xuanya |
货号 | XY-SD-R-1051 |
用途 | 科研 |
包装规格 | 50T |
是否进口 | 否 |
【产品名称】
通用名称:猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)荧光PCR检测试剂盒
Name :Real-Time PCR Method
【包装规格】50T/盒
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】
本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标,用于指标的定量检测辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针,用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名 称 |
规 格 |
|
|
酶液 |
50μL×1 管 |
反应液 |
1.0mL×1 管 |
阳性质控品 |
50μL×1 管 |
阴性质控品 |
250μL×1 管 |
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】
样品处理(样本处理区)
样本前处理
组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;棉拭子取 100μL 进行提取。
【标本采集】
无菌注射器抽取血液 3~5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管;有神经系统症状的,动物戒病人取脑脊液进行检测;疑似污染的食物取 1g 进行检测
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但丌能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
1.1样本前处理
固体样本:手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;液体样本:直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;
脑脊液直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;
血液样本:取抗凝血下层血细胞 50μL,加入 100μL 双蒸水吹匀。
DNA 提取
对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。
试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 |
反应液 |
酶液 |
用量(样本数为 N) |
20μL |
1μL |
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。
加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
PCR 扩增(核酸扩增区)
将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)
NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。
推荐循环参数设置:
步骤 |
循环数 |
温度 |
时间 |
收集荧光信号 |
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
结果分析判定
结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
检测方法的局限性
样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
质控标准
阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
患病动物:腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人:痰;尿液、血液
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行;
试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
反应液应避光保存;
反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【产品图片】
上海烜雅生物科技有限公司生产的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)荧光PCR检测试剂盒供应质量高,价格低,售后有保证。为您的实验保驾护航。
请直接向我司客服索取说明书
本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断。
猪传-染性胃肠-炎病毒(TGEV)荧光PCR检测试剂盒 产品:
人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA试剂盒
人CD14分子(CDl4)ELISA试剂盒
人凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒
人白细胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒
人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒
人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)ELISA试剂盒
人角化细胞生长因子(KGF)ELISA试剂盒
人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒
人CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒
人CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒
人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒
人基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒
人淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒
人α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒
人可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒
小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒 |
小鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)ELISA试剂盒 |
小鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA试剂盒 |
小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒 |
小鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒 |
小鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒 |
小鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒 |
小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA试剂盒 |
小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒 |
小鼠16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA试剂盒 |
小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒 |
小鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒 |
小鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA试剂盒 |
小鼠促黄体激素(LH)ELISA试剂盒 |
小鼠血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒 |
小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒 |
小鼠绒毛膜促-性腺激-素(CG)ELISA试剂盒 |
小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒 |
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 |
小鼠C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒 |