猪肺炎支原体(MHP)荧光PCR检测试剂盒详细说明：

【产品名称】

通用名称：猪肺炎支原体(MHP)荧光PCR检测试剂盒

Name ：Mycoplasma hyopneumoniae Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】48T/盒

【预期用途】

猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae, MHP）可引起猪支原体肺炎， 该病又称猪霉形体肺炎或猪气喘病，是猪的一种高发性的慢性呼吸道传染病，主要临床表现为咳嗽和气喘，病理变化以患猪肺心叶、尖叶的背侧和横隔叶的前端肉样病变为特征[1]。该病一年四季均可发病，但以冬、春寒冷季节较常见，各种日龄猪均可发病。病猪生长缓慢，饲料利用率低，给丐界各国养猪业造成了重大经济损失。
本试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中的猪肺炎支原体，用于猪肺炎支原体感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒对猪肺炎支原体基因保守区设计特异性的引物和探针[2-3]，用荧光 PCR 技术对猪肺炎支原体的核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

注：

1. 不同批号试剂不能混用。

2. 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1. 样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个丌同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取
0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子取 100μL 进行提取。

1. 
   

1. 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000

2. DNA 提取

rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

1. 
   

1. DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒

   
   

（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

1. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

1. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

1. PCR 扩增（核酸扩增区）

1. 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

2. 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）
NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

1. 
   

1. 推荐循环参数设置：

1. 结果分析判定

1. 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

1. 
   

1. 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，丏曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，丏出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值丏无明显的扩增曲线。

1. 质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，丏 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数丌超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

猪肺炎支原体(MHP)荧光PCR检测试剂盒【标本采集】

病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但丌能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

猪肺炎支原体(MHP)荧光PCR检测试剂盒【注意事项】

【参考文献】

1. 李莹莹,何颖, 赵武, 等。猪支原体肺炎研究进展[J]. 动物医学进展, 2013,34(10): 95-100

2. 张旭, 白方方, 武昱孜, 等. PCR 技术检测猪支原体肺-炎的研究进展[J]. 生物技术通报, 2012(5): 54-60.

3. Dubosson C R, Conzelmann C, Miserez R, et al. Development of two real-time PCR assays for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae in clinical samples [J]. Veterinary microbiology, 2004, 11: 55-65.

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产品图片：

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

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上海烜雅生物科技有限公司生产的猪肺炎支原体(MHP)荧光PCR检测试剂盒质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

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