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非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒(预混)
起批量( 价格
≥1 ¥2000元/盒
  • 供货能力:100
  • 最低订购量:1盒
  • 可销售总数量:100盒
  • 建议零销价:2000元/盒
  • 发布日期: 2019-10-08
  • 更新日期: 2019-12-06
产品详细说明
品牌: xuanya 产地: 国产
货号: XY-0010 含量:
用途范围: 科研 产品规格: 50次
CAS: 是否进口:

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒(预混)


【名称】

通用名:非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒

汉语拼音:Feizhou zhuwenbingdu Yingguang PCR Jiance Shijihe

英文名称:African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit

【主要成分与含量】

产品组分

    规格(25测试/盒)

样本处理液A

1 管(800μl/管)

样本处理液B

1 管(800μl/管)

PCR混合反应液

1 管(500μl/管)

ASF阴性对照

1 管(100μl/管)

ASF阳性对照

1 管(100μl/管)

【作用与用途】 用于血液、组织、血粉、饲料、环境拭子等样品中的非洲猪瘟病毒的科研检测。

【用法与判定】

1 样品处理

1.1 血液样品:用EDTA抗凝采血管采集血液,充分混匀,编号。

1.2 组织样品:用无菌剪刀和镊子剪取病死或剖杀猪主要脏器(淋巴结、*、扁桃体)约2g,加入10ml PBS或生理盐水,于研钵或组织匀浆器中充分研磨后转入1.5 mL离心管中编号备用。

1.3 血粉样品:取血粉约2g,加入10ml PBS或生理盐水混合均匀,编号备用。

1.4 饲料、环境拭子等样品:参照专用的商品化提取试剂盒的说明书操作。

2 操作步骤

2.1 病毒DNA的提取

2.1.1 待检样品份数总和用n表示 ,取n个灭菌的1.5ml离心管,逐管编号

2.1.2 每管加入样本处理液A 30μl

2.1.3 每管分别加入已处理的待检样品3μl,充分混匀,室温(18-25℃)处理5分钟,旋涡震荡30秒

2.1.4 每管加入样本处理液B 30μl,震荡混匀,待检

2.1.5 处理后的样本如在2小时内进行下一步试验,请于4℃保存,如不能立即进行下一步试验,请于-20℃保存。

备注:饲料、环境拭子等其它样品,此步骤同样参照专用的商品化提取试剂盒的说明进行操作。

2.2  PCR试剂分装(在试剂准备区进行)及加样(在样品处理区进行)

2.2.1 将PCR混合反应液复溶,旋涡震荡混匀后瞬时离心后备用。

2.2.2 将PCR混合反应液按20μl/管分装至PCR反应管中(分装数量:n待测样本数+1阳性对照+1阴性对照),并移至样品处理区。

2.2.3 用带滤芯的吸嘴分别取已处理好的样品、阴性对照、阳性对照各5μl分别加到装有PCR混合反应液的反应管中,盖紧管盖,漩涡混匀,瞬时离心,移至扩增检测区。

2.3 PCR扩增检测(在扩增检测区进行)

2.3.1 将PCR管放入PCR仪。

2.3.2 循环参数设定(根据实际情况选择循环参数)

2.3.2.1 常规循环参数:

循环数

温度(℃)

时间

数据收集位点

1

95

3min

-

40

95

15s

-

52

10s


60

35s

数据收集

2.3.2.2 快速循环参数

循环数

温度(℃)

时间

数据收集位点

1

95

1min

-

40

95

8s

-

60

15s

数据收集

2.4 仪器检测通道选择:荧光信号选择FAM 通道。参比荧光NONE,请勿选ROX。

3 结果成立条件

阳性对照:CT值<32并有明显的扩增曲线。

阴性对照:无CT值或者CT值>38,线性为直线或者轻微斜线。以上要求需同时满足,否则本次实验无效,需要重新进行。

4 结果判定

CT值

样本检测结果

≤35并有明显的扩增曲线

阳性,样本中检测出ASFV核酸

在35~38之间

可疑,需重复检测。若重复检测CT值仍在35~38之间,

并有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性

>38或无CT值

阴性,样本中未检测出ASFV核酸

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒(预混)【注意事项】

1.所有实验过程应遵守农业农村部关于非洲猪瘟病毒检测相关的规定。

2.反应体系应在特定配液区中配制,整个实验过程严格控制污染。

3.PCR整个试验分试剂准备区、样品处理区、扩增检测区。流程顺序为试剂准备区→样品处理区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。

4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒建议反复冻融不超过5次

5.-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化,液体融化后需彻底混匀,2000rpm离心15s,使用后立即放回-20℃

6.DNA提取过程中,避免核酸酶污染,尽量缩短操作时间。

7.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,不同批号之间的各组分不要混用。

8.PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒(预混)【规格】25测试/盒

【贮存与有效期】-20℃避光保存12个月。