【产品名称】

通用名称：猪乙型脑炎病毒(JEV)荧光PCR检测试剂盒

Name ：Real-Time PCR Method

【包装规格】48T/盒

猪乙型脑炎病毒(JEV)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】

本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标，用于指标的定量检测辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针，用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称	规 格
核酸提取液	1.5mL×2 管
酶液	50μL×1 管
反应液	1.0mL×1 管
阳性质控品	50μL×1 管
阴性质控品	250μL×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

猪乙型脑炎病毒(JEV)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】

样品处理（样本处理区）

样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子取 100μL 进行提取。

【标本采集】

无菌注射器抽取血液 3~5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管；有神经系统症状的，动物戒病人取脑脊液进行检测；疑似污染的食物取 1g 进行检测

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但丌能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

1.1样本前处理

固体样本：手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；液体样本：直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；

脑脊液直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；

血液样本：取抗凝血下层血细胞 50μL，加入 100μL 双蒸水吹匀。

DNA 提取

对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	反应液	酶液
用量（样本数为 N）	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）

将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）

NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

结果分析判定

结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

检测方法的局限性

样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。

质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

猪乙型脑炎病毒(JEV)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

患病动物：腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人：痰；尿液、血液

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

【产品图片】

【参考文献】

国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.

张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 鼠疫耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.

吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

生产地址：金海公路3265号14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生产的猪乙型脑炎病毒(JEV)荧光PCR检测试剂盒供应质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

请直接向我司客服索取说明书

本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

猪乙型脑-炎病毒(JEV)荧光PCR检测试剂盒 产品：

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1121    铜绿假单孢菌(PA）/绿脓杆菌  核-酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1122    出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1123    致病性大肠杆菌(EPEC)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1124    沙门氏菌(SPP)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1125    沙门氏菌SPP-sdfi核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1126    沙门氏菌SPP-spy核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1127    沙门氏菌SPP-spec核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1128    沙门氏菌SPP-glgc核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1129 鼠疫杆菌(YP)核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

细菌类(人相关）    XY-DT-D-1130 鼠疫杆菌（YP-PLA/CA/3A）核-酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA试剂盒

小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ELISA试剂盒

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC) ELISA试剂盒

小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒

小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒

小鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒

小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒

小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA试剂盒

小鼠脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒

小鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒

小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒

小鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒

小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒

小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA试剂盒

小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA试剂盒

小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒

小鼠CD30分子(CD30)ELISA试剂盒

小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA试剂盒

小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒

小鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒

小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin   1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒

小鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒

小鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒

小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒

小鼠Slit2 ELISA试剂盒

小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒

小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒

小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒

小鼠降钙素原(PCT)ELISA试剂盒

小鼠胰岛-素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒

小鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)ELISA试剂盒

小鼠白介素7(IL-7)ELISA试剂盒

小鼠褪黑素(MT)ELISA试剂盒

小鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒

小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒

小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA试剂盒

小鼠白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒

小鼠肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒

小鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒

小鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA试剂盒

小鼠肝脂酶(HL)ELISA试剂盒

小鼠乙型肝炎核心抗体(HBcAb)ELISA试剂盒

小鼠乙型肝炎e抗体(HBeAb)ELISA试剂盒

小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA试剂盒

小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)ELISA试剂盒

小鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒

小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA试剂盒

小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA试剂盒

小鼠活化蛋白C(APC)ELISA试剂盒

小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒

小鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒

小鼠胰蛋白酶ELISA试剂盒

小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA试剂盒

小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒

小鼠钩端螺旋体IgG(Lep   IgG)ELISA试剂盒

小鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒

小鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒

小鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA试剂盒

小鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒

小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA试剂盒

小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒

小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒

小鼠载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒

小鼠网膜素(omentin)ELISA试剂盒

兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒

小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA试剂盒

小鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒

小鼠硫氧还蛋白还原酶(TrxR)ELISA试剂盒

小鼠硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒

小鼠胶原酶II(Collagenase   II)ELISA试剂盒

小鼠胶原酶I(Collagenase   I)ELISA试剂盒

小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒

小鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒

小鼠钙通道阻滞剂(CCB)ELISA试剂盒

小鼠丙氨酸转氨酶/谷丙转氨酶(ALT/GPT)ELISA试剂盒

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA试剂盒

小鼠视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISA试剂盒

小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒

小鼠戊糖素(Pentosidine)ELISA试剂盒

小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒

小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒

小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒

小鼠多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒

小鼠肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒

小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒

小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)ELISA试剂盒

小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒

小鼠淋巴细胞因子ELISA试剂盒

小鼠抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试剂盒

小鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA试剂盒

小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA试剂盒

小鼠纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒

小鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒

小鼠胰岛-素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒

小鼠胰岛-素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA试剂盒

小鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒

小鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒

小鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒

小鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒

小鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒

小鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA试剂盒

小鼠血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒

小鼠补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒

小鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒

小鼠α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA试剂盒

小鼠α2纤溶酶抑制物(α2-PI)ELISA试剂盒

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA试剂盒

小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA试剂盒

小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒

小鼠α甘露糖苷酶(α Manase)ELISA试剂盒

小鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒