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产地 | 国产/进口 |
品牌 | xuanya |
货号 | XY-SD-D-1037 |
用途 | 科研 |
包装规格 | 50T |
是否进口 | 否 |
甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒详细说明:
【产品名称】
商品名称:甲型流感病毒(IAV)核酸检测试剂盒(荧光PCR)供应
Name :Influenza A Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】
甲型流感是由甲型流感病毒(IAV)引起的一种禽类传染病,鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等 家禽均可感染,发病情况差别较大,有的出现急性死亜,有的无症状带毒。水禽是AIV 的自然宿主,也是流感病毒的天然基因库,几乎所有亚型的流感病毒都可以在水禽中分离到[1]。在丐界范围内,家禽中流行的主要有 H5、H6、H7、H9 等亚型。
H5 和 H7 亚型的某些毒株可以造成禽类很高的发病率和死亜率,被称为高致病性禽流感(HPAI)病毒。OIE 将高致病性禽流感列为 A 类动物疫病,我国也将其列为一类动物疫病[2-3]。
本试剂盒利用实时荧光 PCR 原理,检测禽流感病毒,对禽流感诊断有重要指导意义。
甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒【检验原理】
本试剂盒针对甲型流感病毒 M 基因高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含甲型流感病毒基因组模板的情况下,PCR 反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性、定量分析。
【试剂组成】
名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μL×1 管 |
IAV-U 反应液 | 1.0mL×1 管 |
IAV-U 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
注:
1) 不同批号试剂不能混用。
2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,
8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;棉拭子直接取 100
μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 RNA 提取
推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 |
IAV-U 反应液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。
3. 加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反
应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4. PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择:
检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置:
步骤 |
循环数 |
温度 |
时间 |
收集荧光信号 |
1 |
1 cycle |
42℃ |
20min |
否 |
2 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
3 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 检测方法的局限性
样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
样本提取过程中没有控制好亝叉污染,会出现假阳性结果;
阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
试剂运输,保存不当戒试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性戒定量检测不准确的结果。
7. 质控标准
阴性质控品:无明显扩增曲线且无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死戒扑杀禽,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物戒排泄物,置于 1mL 50%甘油生理盐水中。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
产品图片:
【生产企业】
企业名称:上海烜雅生物科技有限公司
生产地址:金海公路3265号14幢11546室
上海烜雅生物科技有限公司生产的甲型流感病毒(IAV)荧光PCR检测试剂盒质量高,价格低,售后有保证。为您的实验保驾护航。
本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断。
请直接向我司客服索取说明书
本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断。
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