猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒详细说明：

【产品名称】

通用名称：猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒

Name ：Toxoplasma gondii Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】48T/盒

猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒【预期用途】

弓形虫病是由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）引起的人畜共患病，人及动物为该病的中间宿主，猫为其*宿主。该病广泛分布于丐界各地，严重危害人和动物的健康，我国将其列为二类动物疫病。弓形虫常引起动物収热、、神经及极度虚弱，有点还表现、鼻有分泌物、口吏泡沫、収抖、摇头、脱水和， 母畜収病则引起，给各地畜牧业造成了很大损失。目前还没有理想的弓形虫的药物和疫苗，及时诊断并作出预防是控制该病的有效措施。实时荧光 PCR 技术由于高灵敏、高特异、及时检测等特点，成为弓形虫病检测的収展趋势[1-3]。

本试剂盒适用于检测血液、脑脊液、肝、脾、肾、可疑食物等样本中的弓形虫， 用于弓形虫感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采对弓形虫基因组设计特异性的引物和探针，用荧光 PCR 技术对弓形虫的核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

注：

1） 不同批号试剂不能混用。

2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

固体样本：手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；液体样本：直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；脑脊液直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；血液样本：取抗凝血下层血细胞 50μL，加入 100μL 双蒸水吹匀

1.2 DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000

rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置：

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

7. 质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线且无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

无菌注射器抽取血液 3~5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管；有的，动物戒取脑脊液进行检测；疑似污染的食物取 1g 进行检测

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒【参考文献】

[1] 王频佳, 张德纯. 荧光定量 PCR 检测弓形虫基因方法的建立[J].临床检验杂志, 2005, 23(2): 123-125.

[2] 彭武丽, 季新成, 叱茜, 等. 实时荧光定量 PCR 检测弓形虫 GRA6 基因方法的建立和应用[J]. 新疆农业科学, 2014.

[3] 国家质量监督检验检疫总局. GB/T 18228.2-2008 实验动物-弓形虫检测方法[S]. 北京：科学出版社, 2008.

产品图片：

【生产企业】

企业名称：上海烜雅生物科技有限公司

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上海烜雅生物科技有限公司生产的猪弓形虫 (TOX)荧光PCR检测试剂盒质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

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