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钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量
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≥1 ¥1500元/盒
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  • 发布日期: 2019-01-11
  • 更新日期: 2019-01-11
产品详细说明
品牌: xuanya 产地: 美国/中国
英文名称: Nucleic acid detection kit for Leptospira (Lep) (PCR- fluorescence probe method) 保存条件: -20℃
货号: XY-EP-D-1170 保质期: 1年 个月

【产品名称】

通用名称:钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量

Name :Nucleic acid detection kit for Leptospira (Lep) (PCR- fluorescence probe method)

【包装规格】48T/盒

钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量【预期用途】

本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标,用于指标的定量检测辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针,用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量【注意事项】

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

所有操作严格按照说明书进行;

试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

反应液应避光保存;

反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量【使用方法】

样品处理(样本处理区)

样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;棉拭子取 100μL 进行提取。

【标本采集】

 无菌注射器抽取血液 3~5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管;有神经系统症状的,动物戒病人取脑脊液进行检测;疑似污染的食物取 1g 进行检测

钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但丌能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。


1.1样本前处理

固体样本:手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;液体样本:直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;

脑脊液直接取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;

血液样本:取抗凝血下层血细胞 50μL,加入 100μL 双蒸水吹匀。

DNA 提取

对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒温处理 10min,13,000rpm 离心 5min,取上清液转移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

加样(样本处理区)将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

PCR 扩增(核酸扩增区)

将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)

NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。

推荐循环参数设置:

结果分析条件设定结果分析判定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

检测方法的局限性

样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。

质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。


钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

患病动物:腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人:痰;尿液、血液

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行;

试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

反应液应避光保存;

反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服;

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量【产品图片】

 

【参考文献】

国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.

张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 鼠疫耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.

吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].

【生产企业】

企业名称:上海烜雅生物科技有限公司

生产地址:金海公路3265号14幢11546室 


上海烜雅生物科技有限公司生产的钩端螺旋体(Lep)核酸检测试剂盒(荧光PCR)定量质量高,价格低,售后有保证。为您的实验保驾护航。

  

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本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断。

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